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流式細胞術在感染性疾病中的應用

點擊次數:214 更新時間:2025-11-03
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感染性疾病免疫機制


感染性疾病是指由各種生物性病原體(如細菌、病毒、真菌、寄生蟲等)侵害或寄生人體所引發的疾病。這類疾病具有傳染性和流行性,其發生和傳播與病原體的致病性、宿主的易感性以及環境因素密切相關。


近百年來全球五次大規模傳染病的流行均為呼吸道相關病毒,包括甲型流感病毒(SARS-CoV-2)。病毒感染呼吸道后可誘導固有和適應性免疫應答,觸發抗病毒免疫和級聯炎癥反應。理想有效的免疫應答可以中和病毒、抑制病毒入侵、及時清除病毒感染的靶細胞、維持炎癥與損傷修復之間適當的平衡,最終得以保證機體的穩態。反之,重癥感染和過度的免疫應答可誘導病理損傷,諸如細胞因子風暴,靶器官炎癥失調等可引起多器官組織損傷和功能衰竭。


流式細胞術可用于分析免疫細胞的亞群分布、活化狀態和功能。通過檢測免疫細胞表面的標志物,可以評估機體的免疫功能,為感染性疾病的治療提供指導。如在艾滋病診療中,CD4+T淋巴細胞計數是艾滋病分期的核心指標,流式細胞術可動態監測CD4+T細胞水平,評估抗病毒治療效果及免疫重建情況。再進一步的監測中,流式細胞術可區分初始T細胞、記憶T細胞等亞群,揭示免疫恢復的微觀機制,為免疫功能重建不全患者的監測提供依據。


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免疫細胞激活的時間范圍



流式細胞術在感染性疾病檢測中具有以下顯著優勢:

  • 高靈敏度:可檢測單個細胞的分子變化,早于臨床癥狀出現;

  • 多參數分析:同時評估數十種免疫標記物,繪制“免疫全景圖";

  • 動態監測:實時追蹤治療反應,指導臨床決策;

  • 高通量:每秒可分析數千個細胞,快速處理大量樣本。



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流式細胞在感染性疾病中的檢測項目


01

TBNK淋巴細胞亞群

TBNK細胞是外周血T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞亞群的簡稱,這些細胞是機體免疫功能的重要指標之一,主要用于免疫系統疾病及免疫相關疾病診斷和治療的臨床監測。自身免疫疾病發病、進展以及治療過程中常伴隨著TBNK淋巴細胞數量、比例和功能上的變化。TBNK淋巴細胞亞群檢測能反映機體當前的免疫狀態,輔助疾病診斷,同時對分析疾病的發病機制、B細胞清除療效評估、副作用及預后監測提供參考依據。


TBNK檢測臨床意義

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02

T細胞精細分型

T淋巴細胞起源于骨髓,然后轉移到胸腺中發育成熟,是機體免疫細胞中數目最多、功能最復雜的一類細胞。


流式細胞分析儀FCM根據淋巴細胞表面標志的不同來檢測T淋巴細胞亞群:初始T細胞(CD45RA+CD27+)、中央記憶T細胞(CD45RA-CD27+)、效應記憶T細胞(CD45RA-CD27-)、終末分化效應記憶T細胞(CD45RA+CD27-)、活化亞群(CD38+)、衰老耗竭亞群(PD1,CD57,CD28)等。通過T淋巴細胞亞群的監測可以了解在不同疾病狀態下患者的細胞免疫功能狀態,已經廣泛在腫瘤、自身免疫、感染性疾病中,輔助臨床診斷、幫助了解發病機理、判斷預后和指導臨床治療。若外周血中T細胞總數或不同T細胞亞群的絕對數和比值發生改變,可視為免疫異常。


T細胞精細分型檢測指標

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T細胞亞群報告項目和臨床意義

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03

中性粒細胞指數

CD64是可以識別免疫球蛋白的IgGFc片段I型受體(FcγR1),對IgG單體具有高親和力,介導體液免疫和細胞免疫,對感染性疾病具有早期診斷價值。正常情況下,中性粒細胞表面幾乎不表達CD64。當機體患感染性疾病后4-6小時中性粒細胞表面CD64表達迅速升高,CD64表達可增強中性粒細胞功能,包括細胞吞噬功能。CD64可通過抗體依賴性細胞毒作用、細胞吞噬作用和免疫復合物清除作用實現對病原微生物的清除,可做為感染性疾病良好的診斷依據。


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nCD64指數以1.19為臨界值,判斷是否為細菌感染;≤1.19,判斷為非細菌感染,>1.19,判斷為細菌感染。與革蘭陽性細菌相比,革蘭染色陰性細胞感染時中性粒細胞的CD64表達更高6。膿毒癥發生發展過程中,存在一定的免疫抑制現象,免疫抑制現象與炎癥的嚴重程度有一定的相關性。


*由于方案、溶血素、儀器等不同都會造成熒光強度差異,因此不同實驗室在建立此方案時建議重新驗證參考范圍,以達到精確的判讀效果。


04

單核細胞活化

單核細胞HLA-DR(mHLA-DR)的檢測可直接反映該類細胞的抗原呈遞功能,mHLA-DR水平可反映感染性疾病尤其是急重癥患者機體免疫抑制的狀態,是天然免疫監測的首要指標;外周血單核細胞表面HLADR/CD14的表達率與感染及疾病的嚴重程度密切相關,可作為判斷急重癥疾病嚴重程度和預后的免疫指標。


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研究發現,當表達<30%時,存活率降低,認為<30%的表達是膿毒癥免疫抑制的標準。感染者早期單核細胞HLA-DR表達降低,并證明其與嚴重程度評分、繼發感染及死亡相關。


05

單核細胞亞群

單核細胞根據CD16/CD14進一步分為經典單核細胞(CD14++CD16-,Mo1),主要發揮吞噬功能、中間單核細胞(CD14++CD16+,Mo2)其主要分泌細胞因子,激活淋巴細胞免疫功能、非經典單核細胞(CD14+CD16++,Mo3),其抗原提呈功能增強。從經典到中間型再到非經典單核細胞存在一種發展關系,即在感染過程中或使用巨噬細胞集落刺激因子 (M-CSF) 治療時,首先是中間單核細胞增加,然后是非經典CD14+CD16++單核細胞增加。


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CD14++CD16+中間型和CD14+CD16++非經典單核細胞在哮喘、動脈粥樣硬化、心血管疾病、類風濕性關節炎、癌癥等炎癥性疾病中發現增加。


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結語:


流式細胞術作為一項先進的細胞分析技術,為感染性疾病的臨床診療提供了快速、準確、全面的免疫學檢測手段:


快速診斷:能夠快速檢測和區分不同種類的感染性疾病;


病情監測:可以檢測和量化感染性疾病中的免疫細胞,用于監測疾病進展和治療效果;


預后評估:通過免疫細胞功能分析,評估患者預后和感染風險;


治療指導:為個體化治療方案制定提供免疫學依據。


參考文獻(上下滑動閱覽)

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